Описание на проекта и научната програма

Описание на звеното-бенефициент

Намерението е този проект да се разгърне на базата на вече съществуващите условия и оборудване в Национална специализираната болница за активно лечение на хематологични заболявания - София, (НСБАЛХЗ, която представлява вносител на настоящия проект и се означава като Партньор №1), и по-точно на базата на съществуващите Лаборатория по цитопатология, хистопатология, имунология и имунохимия и Лаборатория по цитогенетика и молекулярна биология в сътрудичество с Клиниката по хематология. НСБАЛХЗ е правоприемник на уникална медицинска институция с 60 годишна история. Тя е създадена първоначално през 1948г. като Научен институт по хематология и трансфузиология. През 1972г. той е включен в рамките на Медицинска академия – София, а от 1990 г. е независима институция – Национален център по хематология и трансфузиология, създаден и с дейност, регулирана с постановление на Министерски съвет. Съгласно Постановление №32/22.02.2008г. НЦХТ е преобразуван в НСБАЛХЗ, в която са съсредоточени дейности, свързани с диагнозата, терапията и проследяването на кръвни заболявания, както и основни изследователски и образователни дейности в областта на Клиничната хематология.

Лаборатория по цитопатология, хистопатология, имунология и имунохимия

Лаборатория по цитопатология, хистопатология, имунология и имунохимия е с насока хематопатология национална лаборатория със специализирани експертни умения в:

Конвенционална (оцветяване по May-Grunwald-Giemsa) цитологична диагностика от костен мозък, периферна кръв, телесни течности (ликвор, плеврална течност, асцит), аспирационна биопсия на достъпни туморни маси, лимфни възли, кожни лезии;

Специализирана цитологична диагностика на хематологични заболявания чрез изследване на клетки от костен мозък и периферна кръв за определяне на ензимна активност, липиди, въглехидрати; определяне на железните депа в костния мозък и пиронинофилия за синтез на РНК.

Специализирана патохистологична диагностика за заболявания на кръвта и лимфоидната тъкан чрез изследване на костен мозък, както за диагностика, така и за стадиране, на лимфни възли чрез използване на референтните методи за изследване патологията на лимфните възли; на слезка; на тумори с друга първична локализация.

Специализирана имунохистохимична диагностика за определяне на повече от 30 левкоцитни антигена за диагностика и субкласифициране на хематологичните неоплазии и тяхното разграничаване от тумори с друг хистологичен произход (карциноми, саркоми, меланом) и за тяхното прецизно субкласифициране; определяне на индекса на пролифрация чрез имунохистихимично маркиране за Ki-67, PCNA, и т.н. с прогностични цели, определяне на туморни маркери (p53, NSE, делокализация на NPM) в неопластичните клетъчни популации.

Флоуцитометричен анализ за: имунофенотипизиране на

  1. лимфоцити в кръвта и в телесните течности и определяне на абсолютния брой на главните субпопулации – В-клетки, CD4+ и CD8+ T-клетки, TCRαβ и TCRγδ Т-клетки, активирани HLA DR+ Т-клетки, NK-клетки, и т.н.;
  2. левкемии от кръв и костен мозък, вкл. откриване на левкемични клетки в други телесни течности (напр. ликор, ексудати в телесни кухини) – определяне на линейната принадлежност на левкемичните клетки (миелоидни, B-/T- /NK-лимфоиди, недиференцирани, бифенотипни, биклонални), матурация, аберантни фенотипи и прогностични маркери;
  3. лимфоми в левкемична фаза в костния мозък или телесни течности – откриване, определяне на лимфоидната диференциация, определяне на прогностични фенотипни маркери или антигени за таргетна терапия;
  4. мониториране на минимална резидуална болест;
  5. брой CD34(+) ХСК в кръвта след мобилизираща терапия и в крайната присадка за ХСКТ; определяне и изброяване на субпопулации ХСК (CD133, CXCR4);
  6. определяне на резидуални левкоцити в обезлевкоцитени кръвни продукти;
  7. определяне на множествена лекарствена резистентност чрез определяне на нивото на MDR1/P-гликопротеин;
  8. флоуцитометрични микросферови методи за количествено определяне на вътреклетъчните нива апоптотични маркери като bcl-2, активирана каспаза -3, cPARP в клетъчни лизати от костен мозък;
  9. флоуцитометричен ДНК анализ.

Определяне на белтъци в серум и други телесни течности: включително

  1. общи имуноглобулини (IgG, IgM, IgA) чрез нефелометричен анализ;
  2. криоглобулини;
  3. С3 и С4 фракции на комплемента, RF, СRP и АST чрез нефелометричен анализ при нужда.

Определяне на моноклонални белтъци IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, свободни каппа и ламбда леки вериги в серум, урина и ликвор чрез:

  1. имуноелетрофореза;
  2. имунофиксация.

Налично е съответно оборудване като хистологичен инструментариум и микроскопи, настолни флоуцитометри FACSCalibur (3-цветен) и FACS CantoII (8-цветен), нефелометър, автоматична система за капилярна електрофореза.

Лабораторията е база и/или активен участник в редица национални научни проекта, финансирани от Националния фонд Научни изследвания, фокусирани върху проблемите на: цитологичните, генотипни, имуноморфологични и флоуцитометрични изследвания на свободния от болест период при пациенти с левкемии и лимфоми; нови подходи за имунофенотипизация на хемопоетични стволови клетки, изследвания на апоптозни и регулаторни маркери при миелодиспластични синдроми (МДС) и ранна диагностика на левкемичната еволюция; съвременни диагностични подходи за стадиране и прогноза при пациенти с ранен рак на гърдата; морфологични, молекулярни и имунологични изслледвания на хетерогенността и клоналната еволюция на Ph-положителните левкемии; както и в няколко международни проекта като този за проучване на апоптозата при МДС и ОМЛ с индийски колаборатори; изследването на р53, MDM2 изоформите & WAF1/cip1 протеинете при Ходжкиновия лимфом, съвместно с Катерата по Хистология, Атински Университет, Гърция; и финансовата подкрепа на International Union Against Cancer (UICC)).(Допълнителни материали – предходни проекти).

Лаборатория по циогенетика и молекулярна биология

Лабораторията по циогенетика и молекулярна биология е натоварена да извършва следните генетични и молеклярни диагностични процедури:

Цитогенетични изследвания - Кариотипизиране чрез хромозомни бендинг техники.

Флуоресцентна in situ хибридизация (FISH) - BCR-ABL/t(9;22); MLL пренареждания, засягащи 11q23; 5q31 нарушения.

Молекулярно-генетични изследвания чрез PCR методи за:

  • Експресия на фузионни гени за: (major) BCR-ABL/t(9;22); (minor) BCRABL/ t(9;22); (micro) BCR-ABL/t(9;22); AML1-ETO/t(8;21); CВFb- MYH11/inv(16)/t(16;16); PML-RARA/t(15;17); MLL-AF9/t(9;11); MLL-AF6/t(6;11); MLL-AF4/t(4;11); TEL-AML1/t(12;21); E2A-PBX1/t(1;19); SIL-TAL1; FLT3-ITD.
  • Аберантна експресия на гените за: MDR1; MRP; BCRP1; LRP; EVI1; BAALC; PRAME; Survivin.
  • Генни пренареждания за: IgH; BCL2-IgH/t(14;18)
  • Други маркери: цитокератин 19; мамоглобин; JAK2 мутации

Количествен PCR за: (major) BCR-ABL/t(9;22); (minor) BCR-ABL/t(9;22); WT1; TELAML1/ t(12;21).

Налично е съответно оборудване като конвенционални термосайклери (MastercyclerGradient, Techne TC3000. Techne TC 412); Real-Time термосайклери (Bioer, RotorGene); CO2 инкубатор Haereus; хибридизатор Haereus; UV крос-линкър; система за фотодокументация; флуоресцентен микроскоп Olympus.

Лабораторията е база и/или активен участник в шест национални научни проекта, финансирани от Националния Фонд Научни изследвания върху:

  • прогностичното значение на BCR-ABL транскриптите при пациенти с левкемии; активността на гените на Wilms' tumor (WT1) и surviving и тяхното прогностично значение за постигане на пълна клинична ремисия при болни с ОМЛ;
  • минимална резидуална болест при болни с онкохематологични заболявания след конвенционална или миелоаблативна терапия;
  • 4 международни проекта за приложението на PCR при злокачествени хематологични заболявания, съвместно с Institute Paoli-Calmettes, Marseille, France и финансовата подкрепа на Centre International des Étudiants et Stagiaires (CIES);
  • молекулярен скрининг за генни пренареждания при малигнените хемопатии съвместно с Necker-Enfans Malades, Paris, France, и подкрепата на програмата TEMPUS;
  • разработване на плазмидни стандарти на основните фузионни транскрипти при левкемиите за установяване чрез Real Time quantitative PCR [като компонент научната програма Biomed-I, съвместно с Institute Paoli-Calmettes Marseille, France и подклепата на International Union Against Cancer (UICC) и Европейския съюз по програмата Europe Against Cancer (EAC);
  • молекулярногенетични, имунологични и функциоални изследвания на множествената лекарствена резистентност (MDR) при пациенти с левкемии и специално при пациенти с Ph-положителни остри и хронични левкемии (Bulgarian-Indian Co-operative Project).

Клиника по хематология

Клиниката по хематология е високоспециализирано звено, което концентрира пациенти от цялата страна поради уникалната си възможност да осигури широк набор от дейности в областта на профилактиката, диагностиката и интегрираното лечение на пациенти с вродени и придобити, доброкачествени и злокачествени хематологични заболявания. Клиниката разполага с общо 60 легла, включително 8 бокса за Трансплантация на хемопоетични стволови клетки (ТХСК) и отделение за амбулаторни пациенти. Броят на хоспитализираните пациенти за 2007 г. е 5094, а на амбулаторните пациенти – 5007, с общ брой пациенто-дни 42 454.

Колаборатори в настоящия проект

Партньор №2
Проф. Д-р Елиас Кампо
Отделение по хематопатология, Hospital Clinic, University of Barcelona, Barcelona, Spain

Отделението по хематопатология на Hospital Clinic, University of Barcelona има дългогодишен опит във всички аспекти на диагностичната хематопатология, в това число морфология, имунфенотипизация, цитогенетика, молекулярна биология. Научната дейност на групата през последните 15 години е концентрирана върху генетичните и молекулярни механизми в патогенезата на малигнените лимфоми предимно. В тази област изследователската група за първи път в света разпознава и доказва ролята на Cyclin D1 като специфична алтерация при мантелноклетъчния лимфом (MCL), както и засягането на ключови регулатори на клетъчния цикъл и гените за отговор при ДНК увреда в прогресията на заболяването. Научният екип участва активно в различни международни изследователски мрежи, в това число European MCL Research Network и Leukemia/Lymphoma Molecular Profiling Project.

Партньор №3
Доц. Д-р Спиро Кнстантинов, дм, Георги Момеков, дм, Деян Йосифов - докторант
Лаборатория по експериментална химиотерапия, Фармацевтичен ф-т, МУ, София

Лабораторията е напълно оборудвана и високо квалифицирана и с богат опит в изолирането и установяването на първични култури от хемопоетични клетки, както и за рутинно осъществяване на количествена оценка на цитотоксичност. Съществува дългогодишно сътрудничество с вносителите на този проект, което се изразява в съвместното участие в други научни проекти #VU-L-203/06; #VU-L-705/07.

Партньор №4
Доц. д-р Евгени Хаджиев, ас. д-р Камелия Александрова
Хематологична клиника, УМБАЛ Александровска, МУ-София

Хематологичната клиника е част от най-стария медицински университет в страната, основана през 1975 като самостоятелно клинично звено в рамките на Катедрата по вътрешни болести. Научните интереси на екипа на клиниката са насочени към търсене на прагностични фактори при хроничната лимфоцитна левкемия (ХЛЛ), лимфопролиферативните заболявания и изследване на нови терапевтични подходи при мултипления миелом.

Партньор №5
Доц. д-р Стефчо Горанов, д-р Веселина Горанова-Маринова, дм
 Хематологична клиника, УМБАЛ Св.Георги, МУ-Пловдив

Медицинският университет в Пловдив е основан през 1945. В състава си включва Медицински факултет, Факултет по дентална медицина , Медицински колеж и университетска болница с общ капацитет от 2000 легла. МУ-Пловдив издава собствено научно списание Folia Medica, което се индексира в Medline data-base. Хематологичната клиника е най-голямото хематологично звено в южна България и разполага с 50 легла. Основни научни проблеми, разработвани на тази база са молекуларните аспекти и лечението на костната болест при мултипления миелом, някои аспекти на миелопролиферативните заболявания.

Партньор №6
Доц. Д-р Лияна Герчева, д-р Антонина Желязкова, дм
Хематологична клиника, УМБАЛ Св.Марина, МУ-Варна

Медицинският университет – Варна е основан през 1961 е третият по големина в страната. Хематологичната клиника е насочена към осигуряване на адекватна хематологична медицинска помощ за населението на североизточна България. Разполага с 37 легла и отделение за амбулаторна терапия. Годишният брой хоспитализирани болни е средно 2450.Клиниката работи в тясна колаборация с отделенията по патология, имунология, цитогенетика.

Партньор №7
Доц. д-р Николай Цветков, д-р Ваня Славчева
Хематологична клиника, УМБАЛ, МУ-Плевен

Плевенският Медицински Университет е основан през 1974. Той съчетава образователна и лечебна база, съвременна преклинична база, университетска болница с над 1000 легла за лечение във всички осовни медицински направления, включително хематология. Специфични области на научен интерес представляват тромбофилиите и хроничните миелопролиферативни нарушения, както и хроничните лимфопролиферативни заболявания в сътрудничество с отделенията по патология, имунология и цитогенетика.

Партньор №8
Доц.д-р Юлиян Райнов, д-р Иван Николов
Клиника по хематология и онкология, Военномедицинска академия, София

Военномедицинска академия е основана през 1989 година с постановление на Министерството на отбраната на България като интегрира комплекс от мидицински грижи, обучение и научна дейност. Клиниката по хематология и онкология е една от най-модерно оборудваните клинични бази в страната. Разполага с 30 стандартни болнични легла и 2 бокса за интензивна терапия, както и 20 легла за палиативни грижи. Интересите в областта на хемотологията са съсредоточени върху нови терапевтични подходи при пациенти с лимфоми и миелом.

Партньор №9
Доц. д-р Юлиян Райнов - председател Българско дружество по клинична и трансфузионна хемотология (БДКТХ)

БДКТХ е професионална организация на специалистите в областта на хематологията в България (www.nscth.med-bg.info). Предмет на дейност: (i) подпомагане на медицинската практика и наука в областта на хематологията на национално ниво; (ii) подкрепа на позициите на хематологията като медицинска дисциплина; (iii) натрупване, разпространение и анализ на информация във връзка с хематологичната практика в страната; (iv) хармонизиране с Европейските и световни стандарти; (v) съдействие на процесите на обмен и разпространение на знанияи нова информация, образование и обучение в хематологията. Области на специфична дейност: (i) организация на научни срещи, работни конференции и др.; (ii) курсове за обучение и продължително медицинко обучение; (iii) предложения на законодателни мерки и праграми за подобряване на хематологичната практика в страната; (iv) разпространение на информация, издаване на официален орган – научно списание, методични ръководства и др.; (vi) установяване на контакти с други национални и международни организации. БДКТХ е партньор в разработването на Европейската програма по хематология CVPassport и е съ-вносител на H-Net Project (национален координатор на тази дейност е ст.н.с.ІІ д-р Маргарита Генова).

Партньор №10
Проф. Иван Димов, доц. Михаил Недялков, доц. Румяна Папанчева
Институт по паралелна обработка, БАН-София

Институтът по паралелна обработка на информацията към Българска академия на науките (ИПОИ-БАН) има водеща позиция сред научните институти в България в сферата на компютърните науки, научните пресмятания, работата със суперкомпютри, лингвистиката, комуникациите и контрола. Научният състав включва 62 учени (двама члена на БАН, 5 пълни професори, 23 доценти, 32 научни сътрудници) и 25 специалисти с висше образование. Годишно се публикуват около 100 статии в рецензирани списания и издания на научни конференции. Хабилитирани учени ръководят разработването и защитата на дипломни работи за получаване на магистърска степен на студенти от Софийски университет и Технически университет, София, както и разработването и защитата на докторатнски трудове на докторанти към ИПОИ-БАН. Институтът се състои от шест секции: разпределени изчислителни системи и мрежи от изчислителни машини, паралелни алгоритми, научни пресмятания, високопроизводителни компютърни архитектури, лингвистично моделиране, математически методи за обработка на сензорна информация, изследване и развитие на информационни системи C4I. Стохастичните методи и тяхното приложение са главна научно-изследователска тема за секция „Паралелни алгоритми”. ИПОИ-БАН има спечелени два гранта по 5та и 6та рамкови програми на ЕС: FP5 BIS-21 ’Centre of Excellence’ и FP6 BIS-21++ ’Centre of Competence’. През 2007 ИПОИ-БАН бе отличен от Министерството на образованието и науката като един от най-успешните институти на Българска академия на науките за своето участие в 6-та рамкова програма на ЕС. ИПОИ-БАН координира инициативата Български национален грид и участва в пан- европейския (EGEE, CoreGrid) и регионалния (SEE-GRID) грид проекти към FP6.